一般是將孕雌鼠麻醉然后解剖，胎兒收集到HBSS-1中然后快速斷頭。剝離腦膜和白質(zhì)后，大腦皮質(zhì)收集入HBSS-2液中機(jī)械磨碎。皮質(zhì)碎片移到有0.025%胰酶的HBSS-2液中37°C消化15分鐘。胰酶消化后，細(xì)胞用含有10%胎牛血清的HBSS-2液沖洗兩次，用神經(jīng)基礎(chǔ)培養(yǎng)液重懸細(xì)胞（培養(yǎng)液添加了0.5mM左旋-谷氨酰胺，25μM左旋-谷氨酸，2%B27和0.12mg/mL慶大霉素）。以1×105cell/cm2接種到事先用多聚賴氨酸包被的培養(yǎng)皿上，放到37°C，5%CO2濕溫培養(yǎng)箱里進(jìn)行培養(yǎng)。每3天用吸管換液，一次換0.5mL。體外培養(yǎng)8天細(xì)胞就能用于實(shí)驗(yàn)。
1、取胚胎期第18天（E18）的孕鼠（小鼠的cellculture可取P0-P1的新生鼠，冰上麻醉），用異氟烷混合氣體麻醉（注意：最好不要腹腔注射水合氯醛進(jìn)行麻醉，因?yàn)楦骨蛔⑸鋵?duì)胎鼠影響較大）；
2、在冰上迅速破腹取出胎鼠；
3、將胎鼠的頭剪下放在冰的dissectionmedium里；
4、剝?nèi)テつw組織和顱骨，將大腦連接小腦一起取出放在另一個(gè)裝有冰的dissectionmedium的dish中；
5、將dish放在冰上，將大腦分割成兩半，分割時(shí)在與小腦連接的腹側(cè)基部斷開，這樣便于暴露海馬；
6、撥去腦膜，用小剪刀將海馬剪出。由于皮層細(xì)胞較多，此時(shí)可將接近小腦的那些皮層組織夾去（注意：不要用鑷子擠捏腦組織，這樣會(huì)造成大面積細(xì)胞死亡，不利于后續(xù)的培養(yǎng)）；
7、在dish中將組織用小剪刀減碎；
8、吸取含有組織碎塊的dissectionmedium至5ul的epp管中；
9、靜置一段時(shí)間，待組織碎塊沉降至底部后吸取上清（不需要吸的很干凈）；
10、在另一個(gè)5ml的epp管中按照trysin：DNA酶：digestionsolution=1：1：3的體積比混合，用過濾器過濾后加入組織塊中；
11、在37度消化7-8分鐘，最長(zhǎng)不要超過15分鐘（消化時(shí)間根據(jù)酶的濃度確定），每2分鐘混勻一下；
12、此時(shí)可以在5ml的epp管中準(zhǔn)備trysininhibitor(TI)：dissectionmedium=1：4的混合液（也可以用5%FBS+Neurobasal+B27代替），在預(yù)先coating的dish中加入一定量的5%FBS+Neurobasal+B27混合液；
13、將消化的組織塊從37度中取出、離心，也可自然沉降，吸取上面多余的液體后，加入第12步的混合液中止消化，37度靜置2-3分鐘；
14、以下步驟要求在冰上完成。靜置，待組織塊沉到底或者離心后，吸走上清液，然后加入DNA酶（可用dissectionmedium稀釋），吹打；
15、離心5-6分鐘，吸走上清；
16、加入2-3ml的dissectionmedium后，用移液器或者吸管將碎組織塊吹散；
17、10倍稀釋后計(jì)數(shù)（10ul懸浮液+90ul臺(tái)盼藍(lán)）；
18、按照要求濃度鋪板，然后充分混勻；
注意：一般一只小鼠的腦子可以取得2x10^7-3x10^7個(gè)神經(jīng)元，體外培養(yǎng)3-9天的神經(jīng)元均可以被慢病毒感染。
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